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  • GelRed核酸染料的高灵敏度和安全性
  • 点击次数:596 发布时间:【2016-09-14】
  •    GelRed核酸染料是集高灵敏、低毒性和超稳定于一身的的荧光核酸凝胶染色试剂。其水溶染色剂通过美国环保局安全认定,废弃物可直接倒入下水道,而不会造成任何环境污染。

      GelRed核酸染料无论用于预制凝胶染色还是凝胶电泳后染色,都表现出了极高的灵敏度。为配合 312 nm UV 凝胶成像系统而设计的 GelRed ,在使用了我们新开发的具有的试验步骤后(该试验步骤中使用稀释的 NaCl 溶液替代传统的 TBE 缓冲溶液),在凝胶电泳后染色中优于或者至少相当于 SYBR Gold 。但与 SYBR Gold 不同, GelRed核酸染料在预制凝胶中使用时仍然有极高的灵敏度,事实上GelRed 在检测低浓度、微量 DNA 方面比 EB 表现出更高的灵敏度,尤其对小分子量的 DNA 检测非常灵敏。

      GelRed核酸染料可以满足使用 488 nm 激光凝胶扫描仪或者可见光激发的 Dark Reader 的研究人员的使用要求。 GelGreen 无论是在预制凝胶还是凝胶电泳后染色中都与 SYBR Green I 灵敏度相当,但不存在后者的不稳定性问题。实际上, GelRed核酸染料,特别是 GelRed 非常稳定,可以长期在室温下保存。当这两种染料稀释在 TBE 或者类似的电泳缓冲溶液中时甚至可以使用微波炉加热,便于采用常规方法制备预制凝胶。含有染料的预制凝胶可以成批制备,长期保存。

      同样重要的是, GelRed核酸染料相比 EB 或 SYBR Green I 提高了安全性。 独立的测试服务公司( Litron Laboratories, Inc. )进行的标准艾姆斯氏测试结果表明, 在 18.5 μ g /mL (该浓度远高于推荐用于电泳后染色的 约 4 μ g/mL 的 3X 染色液 )浓度下, GelGreen 没有诱变性,而 GelRed 也仅在 S9 代谢活化时有微弱的诱变性。 GelRed 和 GelGreen 的特殊化学结构使其难以穿透细胞膜进入细胞,正是这一特性降低了染料的细胞毒性。相反, SYBR Green I 广泛地用于活细胞线粒体和核 DNA 染色,这正是由于它能快速的被细胞吞入。由于已知 SYBR Green I 对紫外线导致的突变有强烈的增强作用,因此它的高细胞膜透性使它在紫外环境观察时成为凝胶染色的主要有害物质。

      GelRed核酸染料的使用方法

      将100ml琼脂糖凝胶溶液(浓度一般为0.8%~2%)在微波炉中融化。

      加入5-10µl GelRed核酸染料(如果背景过高可以适当减少用量,如果敏感度过低,可以适当增加用量),轻轻摇匀,避免产生气泡。

      冷却至不烫手时倒胶,待琼脂糖凝胶完全凝固后上样电泳。

      电泳完毕在紫外灯下观察。若使用数码相机照像记录,则关闭相机的闪光灯,放在自动档即可;若使用凝胶成像系统照相,通过调节光圈、曝光时间,选择合适的滤光片,可得到成像清晰、背景较低的照片。

      GelRed核酸染料使用时的注意事项

      1. 胶厚度不宜超过0.5cm,胶太厚会影响检测的灵敏度。加入GoldenView的琼脂糖凝胶反复融化可能会对核酸检测的灵敏度产生一定影响,但不明显。通过凝胶电泳回收DNA片段时,建议使用GelRed核酸染料染色,在自然光下切割DNA条带,避免紫外线与EB对目的DNA产生的损伤,可明显提高克隆、转化、转录等分子生物学下游操作的效率。

      欲知更多GelRed核酸染料详情,咨询。

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