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  • 了解这些使用GelRed核酸染料更加得心应手

  • 点击次数:2357 发布时间:【2017-02-15】
  •    GelRed核酸染料是一种可以替代溴化乙锭(EB)的红色荧光核酸染色剂。由Biotium公司研发推出的EB替代染料,染色效果和EB差不多,在紫外下不容易淬灭,可以用于胶回收。但价格较贵。

      GelRed核酸染料是一种集高灵敏、低毒性和超稳定性于一身的的荧光核酸凝胶染色试剂。其水溶染色剂通过美国环保局安全认定,废弃物可直接倒入下水道,而不会造成任何环境污染。其特点有:

      1)高灵敏度:GelRed 和 GelGreen 是目前市场中zui灵敏的凝胶核酸染料之一;

      2)稳定性极好:可以使用微波炉加热,可以在室温下保存;

      3)广泛的适应性:适用于预制凝胶和凝胶电泳后染色;

      4)更安全:艾姆斯氏试验结果表明,该染料的诱变性远小于溴化乙锭(EB);

      5)染色过程简单:与EB一样,在预制胶和电泳过程中不必担心染料降解;而电泳后染色过程也只需30分钟且无需脱色或冲洗;

      6)对 DNA 和 RNA 的迁移影响小:对核酸迁移的影响小于 SYBR Green I?;

      7)与标准凝胶成像系统以及可见光激发的凝胶观察装置兼容:使用 312nm 激发的 UV 凝胶成像系统时,GelRed 可以的替代EB;使用 254nm 激发的 UV 凝胶成像系统或可见光激发的凝胶观察装置时,GelGreen 足以替代任意一种 SYB染料。但该染料会使小片段DNA迁移慢一些(与EB相比)。

      GelRed核酸染料的贮存:室温避光保存一年;4℃避光保存三年。

      GelRed核酸染料的使用方法:

      一、GelRed预染方法

      1.将GelRed试剂按1:10000溶于琼脂糖凝胶溶液中,充分混匀。(例如:将5ul GelRed 试剂加入到50ml 凝胶溶液中)。注:由于GelRed 具有出色的热稳定性,可将试剂直接加入高温的凝胶溶液中,而不用等凝胶溶液冷却后再加入。

      2.浇制凝胶并使其凝固后上样电泳。注意:使用这种预先加入染色剂的琼脂糖凝胶,每次不易加入太多的 DNA 样品,否则容易造成饱和现象,可以做多个不同浓度的 DNA Marker,以确定* DNA 上样量。

      3.紫外下观察结果。注:如果始终出现拖尾或是条带无法分离的现象,您可以使用后染法对DNA染色,以确认问题是否与染色剂有关。如果使用后染法问题依旧存在,则说明问题与染色剂无关,请尝试减少核酸的上样量后进行电泳。

      二、GelRed后染方法

      1.用H2O将GelRed稀释约3300倍到0.1M Nacl中,制成3X染色溶液。(例如:将15 μl GelRed和5ml的1M NaCl加入到45ml H2O中)。注:GelRed 1X染色溶液同样可用于后染,但其灵敏度要低于3X染色溶液。

      2.将凝胶小心地放入合适的容器中,如聚丙烯容器中。缓慢加入足量的3X染色溶液浸没凝胶。

      3.在室温下轻轻地摇动凝胶板,*的染胶时间为30 分钟,这取决于凝胶板的厚度、琼脂糖或聚丙烯酰胺的浓度和 DNA 的长短。凝胶越厚或琼脂糖的浓度越高,染色所需要的时间就越长。注:染色溶液至少可重复使用2-3次。如果不是立即再用的话,建议将用过的染色溶液冷藏保存。

      4.紫外下观察结果。

      注意:GelRed核酸染料使用前应在室温下彻底融化混匀后使用。

      了解以上内容,对我们使用GelRed核酸染料很有帮助,让我们使用GelRed核酸染料更加得心应手。

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