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  • 对硝酸纤维素膜进行深入讨论和谈一些应用技巧

  • 点击次数:122 发布时间:【2021-12-03】
  •   今天我们对硝酸纤维素膜进行深入讨论和谈一些应用技巧。话不多说下面让我们一起来了解一下吧。
     
      1、蛋白与膜的结合原理
     
      蛋白与膜的结合原理,已知的结合力包括疏水作用力\H键\静电作用力等,确切的结合原理并不明确,主要靠假说来支撑。主要有两种假说:
     
      1)首先两者靠静电作用力结合,然后靠H键和疏水作用来维持长时间结合。
     
      2)首先两者靠疏水作用结合,然后靠静电作用来维持长时间结合。
     
      两条假说,都表明其结合过程分为两步,首先结合和后面长时间结合。由于结合原理的不明确性,导致在这方面的工作非常依赖实践经验。
     
      2、膜对结合的影响
     
      1)膜孔径
     
      有些技术人员倾向使用膜孔径来区分不同的膜,但是请注意这只仅仅限于同一厂家的产品,如果是不同厂家的产品,这种比较是无意义的。膜孔径与层析速度的关系,已在上文描述。
     
      随着膜孔径减小,膜的实际可用表面积递增,膜结合蛋白的量也递增。估量表面积的参数为表面积比率(实际可用表面积与所用膜平面积的比率)。
     
      另外,膜孔径越小,层析速度也越小,那么金标复合物通过T线的时间也就越长,反应也就越充分。
     
      综合以上两点,结论为膜孔径越小灵敏度越高。但是同时也减慢了跑板速度,增加了非特异性结合的机会,也就是假阳性越高。所以要按照试验结果挑选适合实际项目的膜,找到合适的平衡点。
     
      2)不同厂家的膜差异
     
      这个差异主要来源于两点:
     
      1>生产膜时,使用的聚合物和表面活性剂的来源,类型,数量不同。同理,在膜处理中这两类物质一般会对性能产生较大影响。
     
      2>处理过程不同。
     
      3、生物原料,缓冲溶液的试剂和配方
     
      1)生物原料,作为CT线的生物原料使用情况各异,所以这里只做略述。
     
      首先,单克隆抗体与膜的结合优于多克隆抗体,主要时由于多克隆抗体有很多不同的表面位点,而各位点与膜的最佳结合条件都有细微的差别,毫无疑问就增加了优化难度。
     
      其次,分子量越大,蛋白越难结合到固相材料上。
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