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解一下RPMI-1640培养基的配置方法吧

发表时间:2022-12-06  |  点击率:89
  RPMI全称为RoswellParkMemorialInstitute,指的是洛斯维·帕克纪念研究所。RPMI是这个研究所研发的一类细胞培养基,1640是培养基代号。
 
  RPMI-1640培养基是Moore等人于1967年在RoswellParkMemorialInstitute研制,最初针对淋巴细胞培养设计,含BSS+21种氨基酸+维生素11种等。现在已经广泛应用于各种正常细胞和癌细胞的培养,尤其是悬浮细胞的培养,是使用最为广泛的培养基之一。
 
  (也可以参考使用用来养其他细胞,比如我养的巨噬细胞就是典型的贴壁细胞,可以用1640来养。曾经试过用DMEM养这个巨噬,结果全部不贴壁,浪费了珍贵的细胞)
 
  RPMI-1640培养基最初是为淋巴细胞培养专门设计的,其含有多类细胞培养所需的氨基酸、维生素、无机盐等多种成分,但不含蛋白质、脂类或者任何生长因子,需搭配血清和无血清添加物使用。
 
  下面让我们一起来了解一下RPMI-1640培养基的配置方法吧
 
  一、干粉培养基的过滤配制
 
  1、将1升量的干粉在950ml细胞培养级纯净水中溶解
 
  2、加入2克碳酸氢钠,继续搅拌至溶解
 
  3、用1N盐酸或1N氢氧化钠调整到要求的pH,并将溶液体积调至1000ml
 
  4、在超净台内用0.22um滤膜负压过滤
 
  5、将培养基在2~8℃避光保存
 
  二、高压灭菌型的配制
 
  1、将1升的高压灭菌型干粉在900ml细胞培养级纯净水中溶解
 
  2、将溶液pH调至4.0并将溶液体积调至960ml
 
  3、在121℃,15psi高压消毒5分钟
 
  4、将培养基迅速取出,避免过久加热引起成份分解或液体蒸发减少
 
  5、待培养基冷却至室温后,无菌操作加入29.3ml的无菌7.5%碳酸氢钠溶液,及10ml的无菌200mML-谷氨酰胺
 
  6、如有必要,用无菌的1N盐酸或1N氢氧化钠调整pH
 
  7、将培养基在2~8℃避光保存

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