小鼠胰腺腺泡癌细胞266-6的培养和鉴定方法

培养方法

培养基：使用DMEM培养基，并添加10%的胎牛血清（FBS）和1%的青霉素/链霉素（P/S）。

培养条件：细胞需要在含有95%空气和5%二氧化碳（CO₂）的孵箱中，于37℃进行培养。

传代培养：266-6细胞易聚团，每次传代均要保证胰酶消化充分，用含血清培养基终止消化，收集细胞后离心，收集细胞沉淀。细胞沉淀先使用3mL巴氏管轻柔吹打混匀，充分制备成单细胞悬液，再进行分瓶传代。建议的传代比例为1:2至1:3，每周进行23次传代。每次传代，均使用新的培养容器，培养容器二次使用易导致细胞聚团。

细胞复苏：将含有细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入适量培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加适量培养基后吹匀，然后将细胞悬液加入培养瓶中培养过夜，第二天换液并检查细胞密度。

细胞冻存：先将细胞消化并收集，离心后弃上清，加入冻存液，重悬细胞，并分装到冻存管，冻存密度0.81.5×10⁶细胞/mL。将冻存管放入程序降温盒，并放到80℃冰箱，过夜后将冻存管转移到液氮保存。

鉴定方法

形态学鉴定：在倒置显微镜下观察细胞形态，266-6细胞呈现上皮细胞样的形态特性，多为多边形或立方体形，贴壁生长。

分子生物学鉴定：可通过检测细胞中特定基因的表达来鉴定，如检测弹性蛋白酶I/新霉素转基因的表达情况，因为266-6细胞带有该转基因。还可以检测多种消化酶mRNA的表达，266-6细胞保留部分分化的表型，会表达可检测水平的多种消化酶mRNA。

功能学鉴定：利用266-6细胞对某些物质有反应的特性进行鉴定，如该细胞对卡巴胆碱和缩胆囊素有反应，但对P物质、促胰液素或血管活性肠肽（VIP）没有反应，可通过给予相应刺激物，观察细胞的反应来辅助鉴定。