脂质体2000转染法的经验分享

　　1、转染前1天将0.5～2×105细胞接种于24孔培养板，并加入500ul不含抗生素的*培养基，以保证转染时细胞汇合达90～95%。

　　2、准备复合物

　　(1) 将0.8ug DNA稀释于50ul无血清无抗生素的培养液中轻轻浑匀。

　　(2) 将2ul Lipofectamine2000稀释于50ul无血清无抗生素的培养液中，轻轻浑匀，室温孵育5分。注意：必须在25分内进行。

　　(3) 5分后将它们混合，并轻轻浑匀，室温孵育20分。

　　3、吸去培养板的培养基，用PBS或无血清培养基()清洗细胞2次。

　　4、将复合物(总体积100ul)加入培养孔，前后摇动培养板使其分布均匀。

　　5、将细胞放入培养箱孵育4～6h后，可以更换含血清培养液去除复合物(也可不用)。

　　6、24～48h后可以观察转入基因表达情况。

　　7、稳定转染：换含血清培养基24h后将细胞以1：10(或更高比例)传代，1天后更换筛选培养基筛选。

　　8、优化：要保证细胞汇合率达90～95%(比较高);DNA/ Lipofectamine2000比率1：0.5～1：5，一般细胞1：2～3.

　　脂质体2000转染法的主要优点是可用将DNA转染至悬浮或者铁壁细胞培养、转染效率相对较高、对基因片段大小的限制较小等，但是

　　阳离子脂质体2000对细胞的毒性相对较高，为了防止其毒性，要摸索好如下实验条件：脂质体2000与质粒的比例、细胞转染时间等。