一起来了解一下CCK8试剂盒日本同仁的操作方法

　　今天让我们一起来了解一下CCK8试剂盒日本同仁的操作方法是什么吧。
 

　　一、制作标准曲线(测定细胞具体数量时)
 

　　1、先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞。
 

　　2、按比例(例如：1/2比例)依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做3-5个细胞浓度梯度，每组3-6个复孔。
 

　　3、接种后培养2-4小时使细胞贴壁，然后加CCK试剂培养一定时间后测定OD值，制作出一条以细胞数量为横坐标(X轴)，OD值为纵坐标(Y轴)的标准曲线。
 

　　根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量(试用此标准曲线的前提是实验的条件要一致，便于确定细胞的接种数量以及加入CCK后的培养时间。)
 

　　二、细胞活性检测
 

　　1、在96孔板中接种细胞悬液(100μL/孔)。将培养板放在培养箱中预培养(在37℃,5% CO2的条件下)。
 

　　2、向每孔加入10 μL的CCK溶液(注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数)。
 

　　3、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。
 

　　4、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。
 

　　5、如果暂时不测定OD值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化。
 

　　三、细胞增值-毒性检测
 

　　1、在96孔板中配置100μL的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24小时(在37℃，5% CO2的条件下)。
 

　　2、向培养板加入10μL不同浓度的待测物质。
 

　　3、将培养板在培养箱孵育一段适当的时间(例如：6、12、24或48小时)。12后/24h
 

　　4、想每孔加入10μL CCK溶液(注意不要再孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数)。
 

　　5、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。(2h后)
 

　　6、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。
 

　　7、如果暂时不测定OD值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化。
 

　　注意：如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK之前更换新鲜培养基(除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基)，去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。