当前位置:首页  >  新闻资讯  >  一起来了解一下CCK8试剂盒日本同仁的操作方法

一起来了解一下CCK8试剂盒日本同仁的操作方法

发表时间:2020-07-06  |  点击率:770
  今天让我们一起来了解一下CCK8试剂盒日本同仁的操作方法是什么吧。
 
  一、制作标准曲线(测定细胞具体数量时)
 
  1、先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,然后接种细胞。
 
  2、按比例(例如:1/2比例)依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度,一般要做3-5个细胞浓度梯度,每组3-6个复孔。
 
  3、接种后培养2-4小时使细胞贴壁,然后加CCK试剂培养一定时间后测定OD值,制作出一条以细胞数量为横坐标(X轴),OD值为纵坐标(Y轴)的标准曲线。
 
  根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量(试用此标准曲线的前提是实验的条件要一致,便于确定细胞的接种数量以及加入CCK后的培养时间。)
 
  二、细胞活性检测
 
  1、在96孔板中接种细胞悬液(100μL/孔)。将培养板放在培养箱中预培养(在37℃,5% CO2的条件下)。
 
  2、向每孔加入10 μL的CCK溶液(注意不要在孔中生成气泡,它们会影响OD值的读数)。
 
  3、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。
 
  4、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。
 
  5、如果暂时不测定OD值,打算以后测定的话,可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化。
 
  三、细胞增值-毒性检测
 
  1、在96孔板中配置100μL的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24小时(在37℃,5% CO2的条件下)。
 
  2、向培养板加入10μL不同浓度的待测物质。
 
  3、将培养板在培养箱孵育一段适当的时间(例如:6、12、24或48小时)。12后/24h
 
  4、想每孔加入10μL CCK溶液(注意不要再孔中生成气泡,它们会影响OD值的读数)。
 
  5、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。(2h后)
 
  6、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。
 
  7、如果暂时不测定OD值,打算以后测定的话,可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化。
 
  注意:如果待测物质有氧化性或还原性的话,可在加CCK之前更换新鲜培养基(除去培养基,并用培养基洗涤细胞两次,然后加入新的培养基),去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下,可以不更换培养基,直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。

TEL:13811479844