CCK8试剂盒简化了操作流程并减少了实验误差

　　CCK8试剂盒基于WST-8法检测细胞活性和增殖情况。其核心成分是水溶性的四唑盐化合物WST-8，它在电子耦合试剂的帮助下，可被活细胞线粒体中的脱氢酶还原，生成高度水溶性的橙黄色甲臜产物。这种颜色变化的深浅与活细胞的数量直接相关——细胞越多、代谢越旺盛，产生的甲臜越多，溶液颜色也就越深。通过酶标仪在特定波长下测定吸光度，通常选择450nm处的OD值作为量化指标。由于甲臜产物的水溶性特点，无需像传统MTT法那样使用有机溶剂溶解沉淀，简化了操作流程并减少实验误差。
 

　　CCK8试剂盒的测定步骤：
 

　　1.实验设计与铺板
 

　　-细胞准备：选取对数生长期的目的细胞(如贴壁细胞需先消化重悬)，调整密度至适宜范围(通常为5×10~1×10个/孔，具体因细胞类型而异)。避免过高或过低密度导致信号过饱和或灵敏度不足。
 

　　-分组设置：根据需求设置空白组(仅培养基+试剂)、对照组(未处理的正常细胞)、实验组(不同浓度药物/刺激因素处理)。每组设3个以上复孔以保证统计有效性。
 

　　-接种培养：将细胞悬液加入96孔板(常用透明平底板)，每孔体积一般为100~200μL，置于CO培养箱预培养适当时间(如24h)，待细胞贴壁后进行后续处理。
 

　　2.加样与孵育
 

　　-处理干预：按实验方案向各孔添加待测物质(如药物、毒素等)，继续培养一定时间(例如24h、48h)。注意控制处理条件一致性(温度、湿度、CO浓度)。
 

　　-添加CCK8溶液：取出培养板，每孔加入10μLCCK8试剂(推荐比例为培养基体积的1/10，即若每孔原有100μL培养基，则加10μL试剂)。轻轻震荡混匀，避免产生气泡。
 

　　关键细节：无需更换原培养基，直接叠加即可；若药物颜色干扰严重(如深色)，可短暂离心后小心吸取上清再补加新鲜培养基+CCK8。
 

　　3.显色反应与读数
 

　　-避光孵育：将加完试剂的96孔板放回培养箱，避光孵育1~4小时(时间需预实验摸索，通常2小时足够)。随着时间延长，吸光度值会逐渐升高，但超过线性范围可能导致误差。
 

　　-酶标仪检测：使用酶联免疫检测仪在450nm波长下测定各孔吸光度(OD值)。若设备支持双波长模式，可同时读取600nm作为参比波长以校正背景干扰。
 

　　-数据处理：计算各组平均OD值，以空白组调零后，比较不同组间的相对细胞活力(公式：(实验组OD-空白组OD)/(对照组OD-空白组OD)×100)。