CCK8试剂盒的使用注意事项

　　CCK8试剂盒相较于早期的MTT方法，CCK8试剂盒因采用水溶性的WST-8试剂，避免了反复吹打或离心步骤对细胞层的物理干扰，同时消除了颗粒物散射导致的信号偏差，提升了检测精度。整个实验流程无需额外的裂解或洗涤步骤，加入试剂后可直接孵育并读取结果，大大缩短了实验周期。此外，该试剂盒支持高通量筛选模式，适用于大规模药物测试和科研场景。
 

　　与传统放射性同位素标记技术相比，CCK8摒弃了放射性物质的使用，降低了生物安全隐患和废弃物处理成本。其化学性质稳定且无毒副作用的特点也使其更适合长期动态监测细胞状态。从基础研究到应用开发均表现出色，包括但不仅限于药物筛选、细胞毒性评估、肿瘤药敏试验以及生物因子活性分析等领域。
 

　　CCK8试剂盒的使用注意事项：
 

　　1.细胞状态控制
 

　　-确保细胞健康且处于对数生长期，衰老或污染的细胞会导致脱氢酶活性下降，影响结果准确性。
 

　　-贴壁细胞需充分贴壁后再处理；悬浮细胞应离心后重新悬浮，避免分布不均。
 

　　2.操作规范性
 

　　-避免气泡：加样时沿孔壁缓慢加入，减少气泡生成(气泡会散射光线，导致读数偏差)。若有气泡，可用无菌针头刺破去除。
 

　　-防止污染：所有枪头、耗材需灭菌处理，避免微生物污染影响细胞存活率。
 

　　-时间一致性：从加入CCK8到读板的孵育时间必须严格统一(可设置定时器提醒)，因显色速度与细胞代谢相关，时间差异会改变OD值。
 

　　3.干扰因素排除
 

　　-培养基成分干扰：含酚红的培养基可能在450 nm附近有吸收峰，建议使用无酚红培养基；血清浓度过高也可能影响透光率，需保持各孔血清比例一致。
 

　　-药物颜色干扰：若待测药物本身有色(如蓝色、紫色)，需设置额外的“背景校正孔”(不加细胞仅加药物+CCK8)，测定其本底吸光度并扣除。
 

　　-挥发风险：孵育过程中盖紧板盖，防止边缘孔培养基蒸发导致浓度变化(可在周边空孔中加水或PBS密封)。
 

　　4.试剂保存与使用
 

　　-CCK8试剂需避光保存于2~8℃(避免冷冻结冰)，使用前恢复至室温并混匀(颠倒数次即可，不可剧烈震荡)。
 

　　-避免反复冻融，分装保存以提高稳定性；过期试剂可能导致显色效率降低或背景升高。
 

　　5.其他优化建议
 

　　-预实验必要性：初次使用时建议通过梯度时间和细胞密度测试确定检测窗口期(如绘制生长曲线)，确保OD值落在仪器线性范围内(通常0.2~1.5之间)。
 

　　-复孔数量：每组至少设置5个复孔，减少随机误差；标准差过大时需检查细胞是否均匀分布或操作是否存在失误。
 

　　-对照完整性：必须包含空白孔(仅培养基+CCK8)、无细胞对照孔(验证试剂自身是否有颜色变化)和未处理的正常细胞对照孔。