Western Blotting实验技术应用试剂大全-北京沃比森科技有限公司

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Western Blotting实验技术应用试剂大全
点击次数：3389 发布时间：【2013-12-03】

一、 Western blot概述

Western Blot 法采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。经过 PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如 NC膜， PVDF膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。

A. 蛋白抽提 -蛋白样品的制备

蛋白抽提试剂
起始材料	产品名称	货号	规格	价格_（RMB）	品牌
大肠杆菌	BugBuster protein extraction reagent	70584-3	100ml	1059	Merck
大肠杆菌	BugBusterMaster Mix extraction reagent	71456-3	100ml	2377	Merck
酵母细胞，真菌，植物	YeastBuster protein extraction reagent	71186-3	100ml	1194	Merck
昆虫 /哺乳动物细胞	CytoBuster protein extraction reagent	71009-3	50ml	915	Merck
哺乳动物细胞	RIPA buffer solution	89900	100ml	923	Pierce
哺乳动物组织	T-PER 动物组织蛋白抽提试剂	78510	500ml	3405	Pierce
细胞不同部位蛋白提取试剂盒
起始材料	产品名称	货号	规格	价格_（RMB）	品牌
哺乳动物细胞 /组织	ProteoExtract 全蛋白质组抽提试剂盒	539779	Kit	5165	Merck
哺乳动物细胞 /组织	ProteoExtract 亚细胞蛋白质组抽提试剂盒	539790	20T	6081	Merck
哺乳动物细胞 /组织	ProteoExtract 跨膜蛋白抽提试剂盒	71772-3	20T	6014	Merck
哺乳动物细胞 /组织	ProteoExtract 天然跨膜蛋白抽提试剂盒	444810	KIT	5481	Merck
哺乳动物细胞	NE-PER 核蛋白 -胞浆蛋白抽提试剂盒	78833	Kit	2586	Pierce

B. 蛋白酶 /磷酸酶抑制剂

对细胞进行裂解后，与目标蛋白一起释放出来的还有蛋白酶和磷酸酶，它们会水解蛋白为多肽或氨基酸。此过程会导致许多重要蛋白的流失，进而严重的影响下有实验。因此需要在细胞的裂解过程中加入相应蛋白酶或磷酸酶抑制剂，从而保证目标蛋白的完整性。

单一成分蛋白酶抑制剂
抑制剂	货号	规格	价格_（RMB）	品牌	靶蛋白酶家族	可溶解
PMSF		1g	300	Mpbio	丝氨酸蛋白酶（可逆型）	甲醇
AEBSF	J582	50mg	798	Amresco	无毒的 PMSF替代物，丝氨酸蛋白酶（不可逆）	水
亮抑蛋白肽（leupeptin）		5mg	871	Mpbio	丝氨酸 ,半胱氨酸蛋白酶（可逆型）	水
抑肽酶（Aprotinin）		5mg	268	Mpbio	丝氨酸蛋白酶（可逆型）	水
胃抑肽酶 A（Pepstain A）		5mg	531	Mpbio	天冬氨酸蛋白酶（可逆型）	甲醇
抑氨肽酶（Bestatin）	J579	10mg	1784	Amresco	氨基酸多肽酶（可逆型）	甲醇
E-64	J586	5mg	1348	Amresco	可逆型半胱氨酸（不可逆）	水
EDTA ， 2Na		500g	1138	Mpbio	金属蛋白酶（可逆型）	水

单一蛋白酶抑制剂的作用谱始终是受限制，多数情况下未必能完全保证目的蛋白活性不受影响，尤其需要检测同一样品内的多个蛋白时。“Cocktail” -蛋白酶 /磷酸酶混合物此时就是*的选择了。

蛋白酶抑制剂混合片剂（ EASY packs）
抑制剂	货号	规格	价格_（RMB）	品牌	特点
cOmplete ， mini	5892970001	30 片 10ml	2470	Roche	同时持续抑制丝氨酸蛋白酶 ,半胱氨酸蛋白酶及金属蛋白酶等在内的多种蛋白酶；可应用几乎所有的组织及细胞提取物，包括动物，植物，酵母，细菌和真菌样品；整个操作过程只需要将片剂完全溶解到裂解液中；
Complete,mini,EDTA-Free	5892791001	30 片 10ml	2470
cOmplete	4693116001	20 片 50ml	3339
cOmplete ， EDTA-Free	4693132001	20 片 50ml	3339
磷酸酶抑制剂混合片剂（ EASY packs）
抑制剂	货号	规格	价格_（RMB）	品牌	特点
PhosSTOP	14906845001	10 片（10ml）	1292	Roche	同时持续抑制包括酸性和碱性磷酸（脂）酶，及丝氨酸 /苏氨酸蛋白磷酸（脂）酶和酪酸蛋白磷酸（脂）酶在内的多种酶；与 cOmplete蛋白酶抑制剂兼容。
PhosSTOP	14906837001	20 片（10ml）	2432	Roche

C. 蛋白样品的定量

目前常用比色法来确定样品蛋白的含量。将化学试剂加入到蛋白样品溶液中发生颜色变化，利用分光光度计或酶标仪检测这一变化，并与已知浓度的蛋白标准曲线做比较从而确定样品的浓度。WISSEN公司提供 Pierce公司的蛋白定量产品， pierce的 BCA蛋白定量试剂盒是zui的产品之一，深受研究人员的依赖。

常用蛋白定量试剂盒
产品名称	货号	规格	价格_（RMB）	检测波长	重要兼容物		重要不兼容物	蛋白间的均一性
BCA 蛋白定量试剂盒	23227	250T	1254	562nm	去污剂		还原剂，螯合剂	高
改良 Lowry法蛋白定量试剂盒	23240	480T	1338	750nm	SDS	大部分去污剂，还原剂，螯合剂			高
考马斯蛋白定量试剂盒	23200	630T	1175	595nm	还原剂和螯合剂		去污剂	低
660 纳米蛋白定量试剂盒	22662	300T	2136	660nm	去污剂，还原剂		离子型去污剂	低
蛋白标准品及单一试剂
产品名称	货号	规格	价格_（RMB）	检测波长
白蛋白标准品	23209	10*1ml	611	常用蛋白标准品，高纯度，易获得
牛血清γ -球蛋白标准品	23212	10*1ml	765	测定抗体浓度时常用的标准品
BCA 蛋白定量试剂 A	23228	500ml	991	成分：碱性碳酸盐缓冲液中含 BCA和酒石酸盐
BCA 蛋白定量试剂 B	23224	25ml	488	成分： 4%无水硫酸铜溶液
福林酚试剂	F9252	100ml	365	Lowry 法总蛋白定量用试剂（ 2N）

D. 蛋白样品浓缩于纯化

为了节省样本，提高下有实验的成功率，需要对蛋白样品进行浓缩，从而提高蛋白样品的有效检测浓度。在此本公司提供由 Millipore（密理博）的超滤浓缩管（离心过滤），以简单的离心方法将您的蛋白样品浓缩。客户可根据截留的分子量，膜类型，样本体积来选择该产品

超滤浓缩管
产品名称	膜类型	起始体积	浓缩体积	回收率	规格	截留分子量	货号
0.5ml 超滤管	Ultracel （超滤）	0.5ml	15-20ul	≥ 90%	24 个 /盒	3kDa	UFC500324
						10kDa	UFC501024
4ml 超滤管	Ultracel （超滤）	4ml	50ul	≥ 90%	24 个 /盒	3kDa	UFC800324
						10kDa	UFC801024
15ml 超滤管	Ultracel （超滤）	15ml	200ul	≥ 90%	24 个 /盒	3kDa	UFC900324
						10kDa	UFC901024

E. SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳（ SDS-PAGE）

SDS-PAGE 的基本原理是在蛋白质样品中加入 SDS和含强还原剂巯基乙醇或 DTT的样品处理液。 SDS作为强阴离子表面活性剂，破坏蛋白质分子的二级和三级结构；强还原剂断开二硫键破坏蛋白质的四级结构，是蛋白质分离解聚成单链分子。解聚后的侧链与 SDS充分结合形成带负电荷的蛋白质 -SDS复合物，此时蛋白质的电泳迁移率则与所带电荷的性质无关，主要取决于蛋白质的相对分子质量。因此 SDS-PAGE电泳可将不同分子量大小的蛋白质分离开，从而便于对目的蛋白进行研究。

SDS-PAGE 电泳结束后常常通过染色和脱色评定结果的优劣，一般选择考马斯亮蓝 R-250进行染胶，染色灵敏度高。另外也常常对转膜后的凝胶上残余蛋白进行染色，来分析转膜效果的好坏。

聚丙烯酰胺凝胶的配置
产品名称	货号	规格	价格_（_RMB_）	品牌
丙烯酰胺 /甲叉双丙烯酰胺 Acryl/Bis solution （19: 1）, 40% （w/v）	SD6012	500ml	176	Sangon
丙烯酰胺 /甲叉双丙烯酰胺 Acryl/Bis solution （29: 1）, 40% （w/v）	SD6017	500ml	176	Sangon
丙烯酰胺 /甲叉双丙烯酰胺 Acryl/Bis solution （37.5: 1）, 40% （w/v）	SD6014	500ml	176	Sangon
十二烷基硫酸钠（ SDS）	L5750	500g	280	Sigma_分装
（ TEMED） ; N,N,N ’ ,N’ -四甲基乙二胺	T2250	100ml	196	Sigma_分装
（过硫酸铵） Ammonium persulfate	0486	100g	120	Amresco_分装
Western Blotting 缓冲体系的配置
产品名称	货号	规格	价格_（_RMB_）	品牌
Tris	0234	100g	105	Amresco_分装
甘氨酸（ Glycine）	Japan	500g	80	Japan
β -巯基乙醇 - 违禁品	0482	100ml	120	Amresco_分装
Bromophenol blue 溴酚蓝	0449	10g	112	Amresco_分装
Glycerol 甘油	G7893	250ml	95	Sigma_分装
DTT 二硫苏糖醇	233155	10g	330	Merck_分装
考马斯亮蓝 R-250	04821616	25g	389	Mpbio
Ponceau S 丽春红 S		10g	273	Mpbio
Lane Marker Reducing Sample Buffer	39000	5 mL	699	Pierce
Lane Marker Non-Reducing Sample Buffer	39001	5ml	699	Pierce

F 蛋白 Marker

蛋白分子量标准（ Marker）不仅具有指示蛋白条带对应的分子量大小，还可以检测蛋白转移师傅成功或者蛋白样品在凝胶上的电泳程度等作用。选择合适的 Marker不仅方便准确的定性目的蛋白，还能够很好的监测整个实验体系，一遍分析可能遇到的问题， Fermentas公司提供了各种范围的未染色 /预染色的蛋白 Marker以及修饰标记蛋白 Marker。

蛋白 Marker选择
产品名称	旧货号	货号	规格	价格_（_RMB_）
PageRuler Unstained Protein Ladder 10-200kDa	SM0661	26614	2*250ul	300
PageRuler Unstained Broad Range Protein Ladder 5-250 kDa	SM1881	26630	2*250ul	500
PageRuler Prestained Protein Ladder, 10-170kDa	SM0671	26616	2*250ul	870
PageRuler Plus Prestained Protein Ladder, 10 -250kDa	SM1811	26619	2*250ul	1100

G 转膜与封闭

电泳结束后需要将分离后的蛋白质从凝胶体系中转移到固相载体（如 PVDF膜， NC膜）上，并在膜上进行一抗，二抗的孵育与洗涤，zui后进行显色。使用考马斯亮蓝 R-250对转膜后的凝胶上残余蛋白的检测，可以监测转膜效果的好坏。

膜
产品名称	货号	规格 /卷	*_（RMB）	膜的选择
0.2um NC 膜	10401396	30cm*3.00M	2200	7-20KD 蛋白
0.22um PVDF 膜	ISEQ00010	30cm*3.00M	2200	适用蛋白测序和低分子量蛋白印迹
0.45um PVDF 膜	IPVH00010	26.5cm*3.75m	1690	适用多种印迹实验

封闭（ Blocking）是 western blot 以及其他免疫实验中不可或缺的步骤之一，封闭的好坏直接影响背景高低，从而决定是否能跑出一张美观的 WB图。 WB封闭的目的是结合印迹膜上的非特异性位点，常用的如脱脂奶粉， BSA，吐温 -20.

产品名称	货号	规格	价格_（RMB）	品牌
脱脂奶粉	D8340	500G	385	BD
BSA（无蛋白酶）		25g	385	Mpbio
BSA （标准级）		25g	300	Mpbio
吐温 -20	0210316890	500ml	238	Mpbio

H显色

化学显色检测
产品名称	货号	规格	价格_（_RMB_）	品牌
DAB（二氨联苯胺）		1g	211	Mpbio
TMB （ 3,3',5,5'-四甲基联苯胺）		1g	858	Mpbio
BCIP（对甲苯胺蓝）		25mg	420	Mpbio
NBT（氯化硝基四氮唑蓝）		250mg	932	Mpbio
NBT/BCIP 染色试剂	08980871	100ml	699	Mpbio
DAB 显色试剂盒黄色	AR1021	KIT	240	Boster
DAB 显色试剂盒蓝色	AR1024	KIT	240	Boster
AEC 显色试剂盒红色	AR1020	KIT	140	Boster
NBT/BCIP 染色试剂盒	AR1023	KIT	280	Boster
化学发光检测试剂
ECL 化学发光底物	32109	50ml	633	Pierce
ECL 化学发光底物	32106	500ml	2174	Pierce
SuperSignal West Pico 化学发光底物（皮克级）	34080	500ml	2837	Pierce
SuperSignal West Dura 持久性化学发光底物	34075	100ml	3285	Pierce
超敏化学发光底物	34095	100ml	4263	Pierce
X 光片	*57in**	100 片	160	柯达

I 抗体剥离与膜再生

当同一个样本中含有两个或两个以上的蛋白需要检测，当对某一个蛋白的检测结果不理想需要调整实验条件货重新分析做验证实验，有了抗体剥离试剂，讲印迹膜上的抗体洗脱，让你在同一张膜上做多次杂交实验，让你免去重复做电泳和转膜的繁琐不走，大大节省你的试验时间和成本。

化学显色检测
产品名称	货号	规格	价格_（_RMB_）	品牌
Restore ^TMWestern Blot stripping buffer	21062	30ml	332	Thermo
Restore ^TMWestern Blot stripping buffer	21059	500ml	1127	Thermo

J 内参抗体

内参即内部参照，对于哺乳动物细胞表达来说一般是指由管家基因编码表达的蛋白，它们在各种组织和细胞中的表达相对恒定，在检测蛋白的表达水平变化时常用做参照物。

内参的作用： 1检测整个 WB流程是否正常，包括转膜，显色及发光体系等； 2检测基因表达产物是否正确及表达产微量的相对变化； 3校正上样误差，确保蛋白定量结果的可信度；

常用的内参抗体
货号	名称	适应种属	应用范围	规格	价格_（_RMB_）
1854-1	β -actin（ 42kDa）	HU,Ms ， Rt	WB,IHC,ICC	100ul	2500
				50ul	1400
2251-1	GAPDH （ 36kDa）	HU,Ms ， Rt	WB,IHC,ICC ， IP	100ul	2500
				50ul	1400
12009-1	β -Tubulin（ 50kDa）	HU,Ms ， Rt	WB,IHC,ICC,FC,IP	100ul	2500
				50ul	1400

H 标签抗体

沃比森公司提供的标签抗体涵盖 6-Histidine， Flag-tag， HA tag， c-Myc， GST.GFP等常用标签，种类齐全，特异性高，是进行融合蛋白研究不可或缺的辅助工具之一。

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