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    Tris 酚(TRIS饱和酚)/北京/250ml
    基本简介
    市售酚中含有醌等氧化物,这些产物可引起磷酸二酯键的断裂及导致RNA和DNA的交联,应在160℃用冷凝管进行重蒸。重蒸酚加入0.1%的8-羟基喹啉(作为抗氧化剂),并用等体积的0.5mol/L Tris·Cl (pH8.0)和0.1mol/L Tris·Cl(pH8.0)缓冲液反复抽提使之饱和并使其pH值达到7.6以上,为Tris饱和酚(

    Tris 饱和酚是用 Tris-HCl(pH8.0)饱和过的重蒸酚,为浅黄色透明液体,有刺激性气味,上层为 Tris 盐酸缓冲液,pH>7.8,下层为酚相,内加有抗氧化的 8-羟基喹啉。Tris 饱和酚用于分离 DNA。

       Tris 饱和酚的配置:冰箱取出重蒸酚,室温放置,之后 68 度水浴溶化,切勿立即放入 68度的水浴中,以防玻璃炸裂,加 8-羟基喹啉至 0.1%和β-巯基乙醇至 0.2%,(原液14.4MOL/ML),混匀,溶液呈现黄色,倒入分液漏斗中(也可在烧杯中进行)加入等溶剂的 1MOL/ML 的 Tris(PH8.0),反复混匀后,静至分层;放出下层黄色酚液,弃上层、加固体Tris 约 1g/100ml,摇匀,去水相、加 0.1MOL/ML Tris(PH8.0)平衡数次,至 PH 为 8.0、0.1MOL/ML Tris(PH8.0)于棕色瓶中 4 度保存。

      组织裂解液,确保 pH 为 8.0 左右(可加入 0.1 体积的 1M Tris-HCl,pH8.0,将其调为 8.0 左右),再加入 0.5 体积的 Tris 饱和酚(使用时静置,取下层酚相使用。上层为Tris-HCl 溶液,是为阻止酚与空气接触,以减缓酚的氧化),0.5 体积CCL4:异戊醇(24:1) ,振荡 10 秒钟后冰浴 15 分钟。离心后取水相(上层)加等体积异丙醇沉淀 DNA,75%乙醇漂洗 1 次,微干燥后溶于适量 TE 中备用。

      Tris 饱和酚一般 PH 大于 7.8,用于 DNA 的提取。其中,酚是强的蛋白变性剂,可以使细胞或组织中的蛋白质变性析出,而 Tris 的主要作用是防治止酚类氧化,若酚类氧化,则会形成醌(两个苯环),醌含有强自由基,会破坏核酸结构。同时,由于 PH 值大于 7,在碱性环境中 DNA 处于水相,RNA 处于有机相,从而分离上清,即可得到 DNA。

     

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