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MTT实验问题汇总
2013-12-8
实验前应明确的问题1.选择适当的细胞接种浓度。一般情况下,96孔培养板的一内贴壁细胞长满时约有105个细胞。但由于不同细胞贴壁后面积差异很大,因此,在进行MTT试验前,要进行预实验检测其贴壁率、倍增时间以及不同接种细胞数条件下的生长曲线,确定试验中每孔的接种细胞数和培养时间,以保证培养终止致细胞过满。这样,才能保证MTT结晶形成酌量与细胞数呈的线性关系。否则细胞数太多敏感性降低,太少观察不到差异。2.药物浓度的设定。一定要多看文献,参考别人的结果再定个比较大的范围先初筛。根据...
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脂质体转染法-细胞转染技术详解
脂质体是磷脂分散在水中时形成的脂质双分子层,又称为人工生物膜。具有膜的融合及内吞作用,可用作外源物质进入细胞的载体。相对于电穿孔法和磷酸钙共沉淀转染法,脂质体介导转染法简便易行,成本适中,具有较高的转染率和较小的细胞毒性阳离子脂质体表面带正电荷,能与核酸的磷酸根通过静电作用将DNA分子包裹人内,形成DNA一脂复合体,也能被表面带负电荷的细胞膜吸附,再通过膜的融合或细胞的内吞作用,偶尔也通过直接渗透作用,将DNA传递进入细胞,形成包涵体或进入溶酶体其中一小部分DNA能从包涵体内...
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2013-11-28
肿瘤细胞培养技术
肿瘤细胞培养的相关技术:肿瘤细胞在组织培养中占有核心的位置,首先癌细胞是比较容易培养的细胞。当前建立的细胞系中癌细胞系是zui多的。另外肿瘤对人类是威胁zui大的疾病。肿瘤细胞培养是研究癌变机理、抗癌药检测、癌分子生物学极其重要的手段。肿瘤细胞培养对阐明和解决癌症将起着不可估量的作用。一、组织培养肿瘤细胞生物学特性肿瘤细胞与体内正常细胞相比,不论在体内或在体外,在形态、生长增值、遗传性状等方面都有显著的不同。生长在体内的肿瘤细胞和在体外培养的肿瘤细胞,其差异较小,但也并非*相...
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2013-11-28
关于细胞培养中常见的一些技术问题
简单的总结和收集了一些关于细胞培养中,常出现的些技术问题,希望对大家有帮助:1.液体培养基的保存是冷藏好?还是冷冻好?要冷藏!!因为液体培养基经冷冻后再经溶化时,其溶液的pH值会发生改变,溶液往往变碱,某些成分溶解也会受到影响对细胞生长不利。故液体培养基一定要存放在冷藏箱中,通常液体培养基在冷藏条件下可存放6个月~一年。2.液体培养基中谷氨酰胺的作用,及使用方法。几乎所有的细胞对谷氨酰胺有较高的要求,细胞需要谷氨酰胺合成蛋白质,在缺少谷氨酰胺时,细胞生长不良而死亡。所以,各种...
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2013-11-28
细胞冻存与细胞复苏技术
细胞冻存是细胞保存的主要方法之一。利用冻存技术将细胞置于-196℃液氮中低温保存,可以使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来,这样在需要的时候再复苏细胞用于实验。而且适度地保存一定量的细胞,可以防止因正在培养的细胞被污染或其他意外事件而使细胞丢种,起到了细胞保种的作用。除此之外,还可以利用细胞冻存的形式来购买、寄赠、交换和运送某些细胞。细胞冻存时向培养基中加入保护剂--终浓度5%.15%的甘油或二甲基亚砜(DMSO),可使溶液冰点降低,加之在缓慢冻结条件下,细胞内水分透...
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2013-11-27
细胞培养之CCK-8实验方法
今天向大家详细介绍一下细胞培养之CCK-8实验操作方法:1.细胞计数结果按5×104/mL作传代培养接种细胞于96孔板中,共接种21个孔2.24h后开始计测3个孔的细胞的CCK-8值(每个空加入含有10%的CCK-8的培养基,2-4H(根据每个细胞的不同)后在酶标仪上上读取OD值,3.以后每隔24h计数一次,每次取3个孔,分别进行测试。计算平均值。连续计数7d,根据OD值作图。CCK-8法与普通的MTT法相比,具有显著特点:★灵敏度高,数据可靠,重现性好★操作简便...
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2013-11-27
Transwell肿瘤细胞迁移|细胞培养实验流程
Transwell肿瘤细胞迁移实验流程:1基质胶铺板:用BD公司的Matrigel1:8(根据细胞产生mmp的量来决定)稀释,包被Transwell小室底部膜的上室面,置37℃30min使Matrigel聚合成凝胶。使用前进行基底膜水化。2制备细胞悬液①制备细胞悬液前可先让细胞撤血清饥饿12-24h,进一步去除血清的影响。但这一步并不是必须的。②消化细胞,终止消化后离心弃去培养液,(用PBS洗1-2遍),用含BSA的无血清(或者1�S)培养基重悬。调整细胞密度至5×...
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2013-11-27
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