当前位置:首页  >  技术文章  >  脂质体2000转染细胞实验材料及操作步骤

脂质体2000转染细胞实验材料及操作步骤

发表时间:2014-12-05  |  点击率:1940
 一、脂质体2000转染细胞实验材料:
 
1、Vero细胞
 
2、转染级质粒
 
3、DMEM细胞培养液:无血清DMEM、10%血清DMEM
 
4、脂质体2000
 
5、6孔细胞培养板
 
二、脂质体2000转染细胞实验操作步骤:(以6孔板为例予以说明)
 
1、细胞铺板:转染前一天进行铺板,第二天待细胞长成单层即可进行转染。(Vero细胞按一传三的比例进行传代,一般10~12h即可。)
 
2、溶液1:240ul无血清DMEM+10ullipofectamine2000perwell(总体积250ul)(温育5min)
 
3、溶液2:无血清DMEM+4ug质粒perwell(总体积250ul)(根据质粒浓度确定DMEM的体积,但保证总体积为250ul)
 
4、将溶液1与溶液2混合,室温下置20min。
 
5、与此同时,将6孔板中的细胞用无血清DMEM冲洗细胞两遍后,加入1.5ml无血清培养基。
 
6、将溶液1与溶液2的混合液逐滴加入孔中,摇动培养板,轻轻混匀。在37℃、5%的CO2培养箱中培养5~6小时。
 
7、6小时后,更换10%血清的DMEM,在37℃、5%的CO2培养箱中培养48~72h检测转染水平。

TEL:13811479844