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  • 脂质体2000转染细胞实验材料及操作步骤
  • 点击次数:1244 发布时间:【2014-12-05】
  •  一、脂质体2000转染细胞实验材料:
     
    1、Vero细胞
     
    2、转染级质粒
     
    3、DMEM细胞培养液:无血清DMEM、10%血清DMEM
     
     
    5、6孔细胞培养板
     
    二、脂质体2000转染细胞实验操作步骤:(以6孔板为例予以说明)
     
    1、细胞铺板:转染前一天进行铺板,第二天待细胞长成单层即可进行转染。(Vero细胞按一传三的比例进行传代,一般10~12h即可。)
     
    2、溶液1:240ul无血清DMEM+10ullipofectamine2000perwell(总体积250ul)(温育5min)
     
    3、溶液2:无血清DMEM+4ug质粒perwell(总体积250ul)(根据质粒浓度确定DMEM的体积,但保证总体积为250ul)
     
    4、将溶液1与溶液2混合,室温下置20min。
     
    5、与此同时,将6孔板中的细胞用无血清DMEM冲洗细胞两遍后,加入1.5ml无血清培养基。
     
    6、将溶液1与溶液2的混合液逐滴加入孔中,摇动培养板,轻轻混匀。在37℃、5%的CO2培养箱中培养5~6小时。
     
    7、6小时后,更换10%血清的DMEM,在37℃、5%的CO2培养箱中培养48~72h检测转染水平。
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