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NC膜、 PVDF膜 、尼龙膜之间的区别看完就懂

发表时间:2022-01-17  |  点击率:360
  western blot中膜的选择是实验成功的关键点,Western blot实验中一般可以选择硝酸纤维素膜(NC) 和PVDF膜,那NC膜和PVDF膜有什么区别呢?怎样才能选择最恰当的杂交膜进行Western blot实验呢?
 
  NC膜、 PVDF膜 、尼龙膜的特点
 
  尼龙膜是较理想的核酸固相支持物,有多种类型;硝酸纤维素膜(NC膜)是目前应用*的一种固相支持物,便宜;PVDF膜介于二者之间。
 
  就结合能力而言:尼龙膜结合DNA和RNA能力可达480-600μg/cm2,可结合短至10bp的核酸片段;硝酸纤维素膜(NC膜)结合DNA和RNA能力可达80-100μg/cm2,对于200bp的核酸片段结合能力不强;PVDF膜结合DNA和RNA能力可达125-300μg/cm2。
 
  就温度适应性而言:尼龙膜经烘烤或紫外线照射后,核酸中的部分嘧啶碱基可与膜上的正电荷结合;硝酸纤维素膜(NC膜)依靠疏水性相互作用结合DNA,结合不牢固;PVDF膜结合牢固,耐高温,特别适合于蛋白印迹。
 
  就韧性而言:尼龙膜较强;硝酸纤维素膜较脆,易破碎;PVDF膜较强。
 
  就重复性而言:尼龙膜可反复用于分子杂交,杂交后,探针分子可经碱变性被洗脱下来;硝酸纤维素膜(NC膜)不能重复使用;PVDF膜可以重复使用。
 
  PVDF膜即聚偏二氟乙烯膜(polyvinylidene fluoride)是蛋白质印迹法中常用的一种固相支持物。PVDF膜是疏水性的,膜孔径有大有小,随着膜孔径的不断减小,膜对低分子量的蛋白结合就越牢固。大于20000的蛋白选用0.45um的膜,小于20000的蛋白选用0.2um的膜。PVDF膜在使用是需预处理,用甲醇处理的目的是活化膜上的正电基团,使其更容易与带负电的蛋白结合。PVDF膜具有较高的机械强度,是印迹法中的理想固相支持物材料。

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