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  • 葡聚糖凝胶的手工操作方法
  • 点击次数:721 发布时间:【2016-07-11】
  •    葡聚糖凝胶的手工操作方法:

      一般刚拿到手的Sephadex G/葡聚糖凝胶为干粉颗粒。用前,可以用20倍体积的双蒸水泡过夜。或者沸水煮2-4个小时。记得补水。这样Sephadex G/葡聚糖凝胶基本就泡好了。

      葡聚糖凝胶泡好后,将柱子准备好(下筛板装好),先用水冲洗两次。将凝胶混匀(凝胶浓度要适当,太稀会灌得很慢,而太浓的话容易产生气泡,一般1体积的胶,2-3体积的水就可以),轻轻倒入柱中,等柱中液面下降一些后,立刻补加,等胶体积灌得差不多时,静置,让胶完全沉下后,再小心安置上筛板(上筛板不太好安,但多安几次还是能够安好的。可以先装上筛板浸湿,轻轻斜盖在上口,用吸头压入,关键是不能把气泡挤入。再盖平,此时如果筛板上有小量的胶,可以加水混匀再吸走)。此时不停的加水或者其他的缓冲液,不能让柱子干了,如果干了,前面的工作就前功尽弃了,得重新灌了。

      如果有条件,可以用蓝色葡聚糖(1mg/ml)检测一下柱子是否灌得均匀。检测方法与样品的过柱方法相同。

      检测合格后,就可以上样了。样品保证没有沉淀,如果有的话,可以离心或者过滤去除。

      等上筛板上的液体流完,将合适的样品量(不超过柱体积的1/10为好)全倍加入,自然流干。再加少量缓冲液,如0.5ml或者1ml,等流完再加少量缓冲液,如此三次后,就可以多加,或者一直加懑到柱口。

      如果下面接了检测器的话就好办,如果没有检测器,而目标样品有颜色,也比较好收集,如果又没有检测器,又没有颜色,可能得分段收集了,这个谁也偷不得懒。

      等样品收集完,就是冲上20倍柱体积的缓冲液或者水,让小分子物质也流出来,柱子得到再生(这个可以反向冲洗,也就是将柱子倒过来,从出口加入缓冲液,这个可以接一个合适的软管,用一个桡杯接了水放到高处,利用重力自然往下流)。

      葡聚糖凝胶的再生和保存

      凝胶层析的载体不会与被分离的物质发生任何作用,因此凝胶柱在层析分离后稍加平衡即可进行下一次的分离操作。但使用多次后,由于床体积变小,流动速率降低或杂质污染等原因,使分离效果受到影响。此时对凝胶柱需进行再生处理,其方法是:先用水反复进行逆向冲洗,再用缓冲溶液平衡,即可进行下一次分离。

      对使用过的凝胶,若短时间保存,只要反复洗涤除去蛋白质等杂质,加入适量防腐剂即可;若长期保存,则需将凝胶从柱中取出,进行洗涤、脱水和干燥等处理后,装瓶保存。

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